RESUMO Avaliou-se o efeito de curvas de congelação nos parâmetros espermáticos e na fertilidade, usando sêmen de alta e baixa congelabilidade. Experimento 1 - utilizou-se sêmen de quatro garanhões resistentes à congelação: grupo 1, palhetas refrigeradas até 5°C e congeladas com curva de -8°C/min; grupos 2 e 3, palhetas refrigeradas até 5°C (0,5°C/min.) e congeladas com curvas de -20°C/min e -10°C/min, respectivamente. Experimentos 2 e 3 - utilizaram-se cinco garanhões (Mangalarga Marchador), respectivamente, de alta e baixa congelabilidade: grupo 4, a mesma metodologia descrita no grupo 1; grupos 5 e 6, palhetas refrigeradas até 5°C (0,5°C/min) e congeladas com curva de -20°C/min, entre 5°C e -60°C, e -10°C/min, entre -60°C e -100ºC (grupo 5), e -25°C/min, de 5°C até -100°C (grupo 6). O sêmen foi avaliado após descongelamento pelo método computadorizado. No experimento 1, não houve diferença nos parâmetros avaliados. No experimento 2, os parâmetros motilidade total (MT) e motilidade progressiva foram superiores aos do grupo 6 em relação ao grupo 4. No experimento 3, a MT foi superior no grupo 6 em relação ao grupo 4. As curvas de congelação mais rápidas apresentaram melhores parâmetros de cinética espermática, após a descongelação, para o sêmen de garanhões da raça Mangalarga Marchador.

ABSTRACT The effect of freezing curves on sperm parameters and fertility, using resistant and sensitive semen to cryopreservation, was evaluated. In experiment 1, Semen from 4 stallions resistant to freezing was used: Group 1, straws were cooled to 5°C and frozen with a curve of - 8°C/min; Groups 2 and 3, straws were cooled to 5°C (0.5°C/min) and frozen with curves of - 20°C / min and - 10°C/min, respectively. In experiments 2 and 3, 5 stallions (Mangalarga Marchador) presenting respectively resistant and sensitive sperm to cryopreservation were used: Group 4, same methodology described for Group 1 was performed; Groups 5 and 6, straws were cooled to 5°C (0.5°C/min) and frozen with a curve of - 20°C/min. between 5°C and - 60°C and -10°C/min. between - 60°C and - 100°C (Group 5) and - 25°C/min. 5°C to - 100°C (Group 6). Thawed-semen was evaluated by the computerized method CASA. In Experiment 1, there was no difference in the evaluated parameters. In Experiment 2, total motility (MT) and progressive motility (PM) were higher in Group 6 compared to Group 4. In Experiment 3, TM was higher in Group 6 than Group 4. The faster freezing curves showed better parameters of sperm kinetics after thawing, for the Mangalarga Marchador stallion semen.

RESUMO A endometrose é uma alteração degenerativa das glândulas uterinas e do estroma circundante, caracterizada pelo arranjo periglandular de miofibroblastos e pela deposição de matriz extracelular (ECM). O presente trabalho objetivou avaliar a expressão de colágenos tipos I, III e IV e α-actina de músculo liso (α-SMA) nas endometroses equinas, procurando esclarecer a participação dos miofibroblastos na progressão desses processos. Foram utilizadas 24 biópsias uterinas com diagnóstico de endometrose, recebidas pelo Serviço de Patologia Veterinária e de Reprodução Animal da FMVZ, Unesp, Botucatu, SP. Cortes histológicos foram submetidos às técnicas histoquímicas de tricrômico de Masson, picrosirius red sob luz polarizada e ácido periódico de Schiff (PAS) e imuno-histoquímicas para os três tipos de colágeno citados e α-SMA. Ainda, traçou-se um paralelo entre a técnica de picrosirius red e a imunomarcação dos colágenos tipos I e III. A análise histológica revelou que as fibras de colágeno denso correspondem ao colágeno tipo I, predominantes nas endometroses inativa e inativa destrutiva. As fibras de colágeno frouxo correspondem ao colágeno tipo III, predominantes nas endometroses ativas e ativas destrutivas. Nesses mesmos processos, a membrana basal revelou espessamento, aparentemente não relacionado ao colágeno tipo IV, e uma maior imunomarcação de miofibroblastos periglandulares em relação às endometroses inativa e inativa destrutiva. Dessa forma, nota-se que os miofibroblastos estão relacionados ao aumento na deposição de colágeno tipo III nos ninhos fibróticos ativos.

ABSTRACT Endometriosis is a degenerative change of the uterine glands and surrounding stroma, characterized by periglandular arrangement of myofibroblasts and deposition of extracellular matrix (ECM). The aim of this study was to evaluate the expression of collagen type I, III and IV and α-smooth muscle actin (α-SMA) in equine endometriosis, and investigate the role of myofibroblasts in the progression of these processes. A parallel was made with histochemical techniques of Masson's trichrome, Picrosirius Red under polarized light and Periodic Acid-Schiff (PAS). Twenty four uterine biopsies received by the Veterinary Pathology Service and Animal Reproduction of FMVZ, UNESP, Botucatu, SP, were diagnosed with endometriosis. Histological analysis revealed that the orange dense collagen fibers correspond to type I collagen, being prevalent in inactive and inactive destructive endometriosis. The green loose collagen fibers correspond to type III collagen, and are predominant in active and active destructive endometriosis. In the same processes, a greater amount of periglandular myofibroblasts were observed in comparison to inactive and inactive destructive endometriosis. The presence of these cells in active processes are strongly related to an increased deposition of collagen type III in fibrotic nests. Regarding the basement membrane, the active destructive and active endometriosis shows thickening, apparently not related to an increase in expression of type IV collagen. The active destructive and inactive destructive endometriosis exhibited disruption areas in type IV collagen fibers. Thus, it is noted that the myofibroblasts are related to increased deposition of type III collagen in active fibrotic nests.

A recuperação de espermatozoides da cauda do epidídimo pode ser a última chance para preservação do germoplasma quando ocorre morte súbita ou lesão grave em garanhões de alto valor genético. O presente trabalho comparou a viabilidade após refrigeração dos espermatozoides do ejaculado (G1), recuperados da cauda do epidídimo imediatamente após a orquiectomia (G2) e recuperados após armazenamento do epidídimo por 24 horas a 5ºC (G3). No G1 foram colhidos dois ejaculados. Uma semana após a colheita dos ejaculados os garanhões foram submetidos à orquiectomia bilateral e realizada a colheita dos espermatozoides da cauda do epidídimo de um testículo de cada garanhão (G2). O testículo contralateral permaneceu a 5°C por 24 horas, antes da recuperação espermática (G3). A análise das amostras foi realizada imediatamente após a adição do meio de refrigeração, e após 24 e 48 horas de armazenamento a 5°C. Após 24 e 48 horas de armazenamento, os espermatozoides do epidídimo demonstraram características de cinética maiores que os do ejaculado (P<0.05). Estes resultados indicam que espermatozoides recuperados da cauda do epidídimo foram mais resistentes ao processo de refrigeração, com maiores parâmetros de cinética espermática e integridade da membrana plasmática quando comparados aos espermatozoides do ejaculado.

After a serious injury or sudden death, epididymis cauda sperm recovery and cryopreservation may present as the last opportunity to obtain genetic material from a valuable stallion. This study evaluated the viability of cooled equine sperm collected by three different methods: sperm of ejaculated (G1), sperm recovered from the epididymal cauda immediately after orchiectomy (G2) and sperm recovered from the epididymal cauda after storage for 24 hours at 5°C (G3). To obtain G1 sperm, two ejaculates were collected. After 1 week, all stallions underwent a bilateral orchiectomy, and one of the removed epididymides was flushed to obtain G2 sperm. The contralateral epididymis was stored at 5°C for 24 hours before being flushed to obtain G3 sperm. The sperm samples were evaluated immediately after the addition of the refrigeration extender, and after 24 and 48 hours of storage at 5°C. After 24 and 48 hours of storage, the epididymal sperm demonstrated higher motility traits when compared to the ejaculated sperm (P<0.05). These results indicate that sperm recovered from the epididymal cauda of stallions are more resistant to the cooling process, with higher kinetic parameters and plasma membrane integrity when compared to the ejaculated sperm.

Avaliaram-se, por método imunoistoquímico, a expressão e distribuição das metaloproteinases (MMP) 2 e 9 em amostras de endométrio hígido e de éguas portadoras de endometrite crônica. Foram utilizadas 60 biópsias endometriais. A MMP-2 foi observada na parede vascular, nas células estromais e no epitélio glandular, e a imunorreatividade mais intensa foi obtida nas células do epitélio glandular nas endometrites da categoria III e na parede vascular nos endométrios da categoria I. A marcação imunoistoquímica para MMP-9 mostrou-se difusa pelo endométrio e foi observada no epitélio luminal e glandular, na região da parede vascular, nas células estromais, endoteliais e do infiltrado inflamatório. Houve diminuição da marcação imunoistoquímica na região da parede vascular conforme aumentou o grau das lesões endometriais concomitante à diminuição da intensidade da reação. Não houve relação na expressão imunoistoquímica das metaloproteinases estudadas com o tipo de endometrite

The expression and distribution of matrix metalloproteinases (MMP) 2 and 9 were evaluated in helth endometrium and in chronic endometrites of mares by means of immunohistochemistry method. Sixty endometrial biopsies were utilized. Expression of MMP-2 was observed in vascular wall, stromal cells, and glandular epithelium. More intense immune reaction was seen in glandular epithelial cells in category III endometritis and in vascular wall in category I endometrium. MMP-9 immune reaction was diffuse and was seen in luminal and glandular epithelium; vascular wall region; and stromal, endotelial, and inflammatory cells. There was a decreased of the immunohistochemical marking in vascular wall region as increased the degree of endometrial injury, as well as reducing the intensity of reaction in this compartment. There was no relation in immunohistochemistry expression of metalloproteinases with the type of endometritis